参考标准《GB/T 21323-2007 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定 高效液相色谱-质谱质谱法》

        目前有关妥布霉素检测的文献和标准较少，主要参考标准《GB/T 21323-2007 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定 高效液相色谱-质谱质谱法》；高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)具有高灵敏度和高特异性，适用于基质复杂、样品组分含量很低的兽药残留的确证分析。

方法优势
    迪马科技开发的《鱼肉中妥布霉素的检测》：
(1) 采用三氯乙酸水提取、ProElut PXC固相萃取柱净化和超高效液相色谱-质谱法检测；
(2) 具有前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好、净化效果优异等特点；
(3) 使用氰基液相色谱柱进行分析，峰形和保留时间均符合要求；
(4) 过柱方法简单易操作，对操作人员要求不高，检测成本相对较低；
(5) 定量限是20 μg/kg，与国标方法一致。

鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法

1、适用范围
        本方案适用于鱼肉中妥布霉素检测。本方法定量限是20.0 μg/kg。

2、 标准品配制
(1) 单标储备液1000 μg/mL，准确称取妥布霉素，用水配制成1000 μg/mL的储备液。
(2) 中间液10.0 μg/mL，吸取适量单标储备液1000 μg/mL，用水配制成10 μg/mL的中间液。

3、提取
(1) 称取样品（鱼肉）5.0 g（精确至0.05 g），置于50mL离心管中。加入20 mL三氯乙酸水（25 g/L）和2 mL二氯甲烷，涡旋分散，振荡5 min，8000 r/min离心2min，收集上清液；
(2) 在上清液中加入5 mL乙腈混匀，8000 r/min离心2 min，待净化（离心为了去除乙腈水溶解时产生的气泡）。

4、净化—— ProElut PXC 60 mg/3 mL（Cat.# 68203）
(1)活化： 依次加入3 mL甲醇，3 mL水，流出液弃去；
(2)上样： 将上样液加入柱中，流出液弃去；
(3)淋洗： 依次用5 mL水、3 mL甲醇淋洗，流出液弃去；
(4)洗脱： 3 mL 20%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液；
(5)定容： 将洗脱液在40 ℃水浴下通入氮气吹至0.2 mL，然后用流动相重新定容至0.5 mL，上机分析。
同方法制备基质匹配标准溶液。

5、色谱条件
UPLC 条件：
色谱柱：Platisil CN，150 x 4.6 mm，5 μm (Cat.# 99506)
流  速：0.5 mL/min   
进样量：5 μL  
柱  温：35 ℃
流动相： A：3%甲酸水    B：3%甲酸乙腈    A：B=9:1

质谱条件：

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

6、添加回收结果

鱼肉中妥布霉素检测的添加回收结果(%)

妥布霉素标准品0.2 μg/mL的MRM色谱图

鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法相关产品信息

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