参考标准《SN/T 3536-2013 出口食品中酸性橙Ⅱ号的检测方法》

        酸性橙Ⅱ属于化工染料，通常是金黄色粉末，故俗称金黄粉。食品工业中，酸性橙Ⅱ属非食用色素，食品中禁止加入。这些物质如果在食品加工中使用，人食用后可能会引起食物中毒，长期食用甚至会致癌。

方法优势
迪马科技依据《SN/T 3536-2013 出口食品中酸性橙Ⅱ号的检测方法》，开发了《鸡精和味精中酸性橙Ⅱ号的检测》方案：
(1) 采用氨水乙醇提取、ProElut NH₂固相萃取柱净化、高效液相色谱法检测；
(2) 具有前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好、净化效果优异等特点；
(3) 定量限是0.1 mg/kg，与标准方法一致；
(4) 过柱方法简单易操作，对操作人员要求不高，检测成本相对较低。

鸡精和味精中酸性橙Ⅱ号的检测——SPE/HPLC法

1、适用范围
        本方案适用于鸡精和味精中酸性橙Ⅱ的检测，方法定量限0.1 mg/kg。

2、 标准品配制
(1) 储备液100 mg/mL，准确称取各标准品，用水配制成100 μg/mL的储备液。
(2) 中间液10 μg/mL，分别吸取各单标标准储备液，用水配制成10 μg/mL的中间液。

3、提取
(1) 2 g样品，加入20 mL 氨水乙醇溶液，超声提取10 min，振荡5 min，6000 rpm离心2 min，收集上清液；
(2) 下面残渣再用20 mL 氨水乙醇溶液重复提取一次，合并两次上清液；
(3) 取出20 mL上清液，40 ℃下减压蒸至低于5 mL，用水定容至10 mL，混匀，准备净化。

4、净化—— ProElut NH₂ 500 mg/6 mL（Cat.# 63305）
(1)活    化： 依次向柱中加入6 mL甲醇、6 mL 2%甲酸水，弃去流出液；
(2)上    样： 将待净化液加入柱中，弃去流出液；
(3)淋    洗：向柱中一次加入6 mL 2%甲酸水和6 mL甲醇，弃去流出液；
(4)洗    脱： 向柱中加入6 mL 10%氨水甲醇，收集流出液；
(5)定    容： 将洗脱液在50 ℃下氮吹近干，用水定容至1 mL，上机分析。

5、色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18(2)  250 x 4.6 mm，5 μm（Cat.#：99603）
流速：1.0 mL/min
进样量：20 μL
柱温：35 ℃
检测器：UV 484 nm
流动相：甲醇：0.02 mol/L乙酸铵=65:35

6、添加回收结果

表1  调料中酸性橙Ⅱ检测的添加回收结果

酸性橙Ⅱ标准品(0.5 μg/mL )检测的液相色谱图

酸性橙Ⅱ标准品(0.1 μg/mL )检测的液相色谱图

味精（添加水平为0.5 mg/kg）中酸性橙Ⅱ检测的液相色谱图

味精（添加水平为0.1 mg/kg）中酸性橙Ⅱ检测的液相色谱图

味精（空白样品）中酸性橙Ⅱ检测的液相色谱图

鸡精（添加水平为0.5 mg/kg）中酸性橙Ⅱ检测的液相色谱图

鸡精（添加水平为0.1 mg/kg）中酸性橙Ⅱ检测的液相色谱图

鸡精（空白样品）中酸性橙Ⅱ检测的液相色谱图
 

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