2018-12-25
草甘膦(Glyphosate，Gly)是广泛使用的一类广谱非选择性除草剂，以其高效、廉价等特性被运用于全球各个农业和非农业领域。其在环境和生物体中富集并通过食品进入人体，会对人体健康造成危害。随着其在茶叶上的广泛使用，草甘膦及其主要代谢产物氨甲基膦酸残留问题也越来越受关注。目前常用的检测方法为离子交换净化、七氟丁醇(HFB)和三氟乙酸酐(TFAA)衍生后GC-MS检测，或9-芴基甲基三氯甲烷衍生后LC-MS/MS检测，这些方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题，因此建立一种简便、快捷、有效的草甘膦及其代谢物残留的检测方法具有重要的意义。
迪马科技在参考各种标准及文献的基础上，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定茶叶中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的检测方法：采用水提取，ProElut GLY固相萃取专用柱净化样品，收集流出液，Dikma Polyamino HILIC色谱柱分离检测，该方法特点：
1) 前处理步骤少，提取液直接通过净化柱接收流出液即可；
2) 有机溶剂消耗量小，前处理过程中也无需使用酸碱试剂；
3) 仪器分析简单，样品无需衍生直接分析，可提高结果稳定性及减少实验成本；
4) 方法定量限0.1 mg/kg。
以下为详细解决方案，敬请参考！
茶叶中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法
1、适用范围
本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.1 mg/kg。
2、标准品配制
单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。
混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 μg/mL、10 μg/mL和50 μg/mL的混标标准中间液。
3、提取
取1 g茶叶于50 mL离心管中，准确加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取5 mL上清液，待净化。
4、净化——ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938）
(1)活 化： 依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；
(2)上 样： 将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 μm尼龙滤膜，上机分析。
注：同方法制备基质匹配标准溶液。
5、UPLC-MS/MS条件
5.1 UPLC 条件
色谱柱：Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#：99302)
流 速：0.2 mL/min 进样量：10 μL 柱 温：35 ℃
流动相： A：乙腈 B：5 mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11
梯度设置：
|
Time（min） |
0 |
2 |
2.1 |
8 |
8.1 |
15 |
|
A（%） |
80 |
80 |
20 |
20 |
80 |
80 |
|
B（%） |
20 |
20 |
80 |
80 |
20 |
20 |
5.2 质谱条件
|
电离模式：ESI |
扫描方式：负离子扫描 |
|
检测方式：多反应监测 |
电喷雾电压：-4500 V |
|
雾化气压力：60 psi |
辅助气压力：60 psi |
|
气帘气压力：35 psi |
离子源温度：550 ℃ |
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
|
目标化合物 |
定性离子对 （m/z） (母离子/子离子) |
定量离子对 （m/z） (母离子/子离子) |
碰撞气能量/eV |
去簇电压/V |
|
氨甲基膦酸 |
109.9/62.8 |
109.9/62.8 |
-23 |
-53 |
|
109.9/78.9 |
-35 |
-51 |
||
|
草甘膦 |
167.8/62.8 |
167.8/62.8 |
-30 |
-50 |
|
167.8/81.0 |
-21 |
-31 |
6、添加回收结果
茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS检测添加回收结果：
|
样品 基质 |
回收率（%） |
|||||
|
添加水平：0.1 mg/kg |
添加水平：1 mg/kg |
添加水平：5 mg/kg |
||||
|
加标量：1.0 μg/mL，加100 μL |
加标量：10 μg/mL，加100 μL |
加标量：50 μg/mL，加100 μL |
||||
|
氨甲基膦酸 |
草甘膦 |
氨甲基膦酸 |
草甘膦 |
氨甲基膦酸 |
草甘膦 |
|
|
绿茶 |
103 |
91 |
99 |
109 |
92 |
101 |
|
花茶 |
95 |
105 |
109 |
85 |
93 |
99 |
|
铁观音 |
84 |
81 |
83 |
94 |
80 |
100 |
|
红茶 |
100 |
101 |
86 |
85 |
89 |
98 |
|
普洱茶 |
80 |
95 |
89 |
95 |
88 |
102 |
.png)
茶叶中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法相关产品信息：
|
货号 |
名称 |
规格 |
|
样品前处理 |
||
|
65938 |
草甘膦检测专用固相萃取柱 ProElut GLY |
6 mL, 30/pk |
|
244358 |
12管防交叉污染真空SPE萃取装置 |
12位 |
|
4803 |
1,3,6 mL柱管通用连接器 |
15/pk |
|
4806 |
考克(控制流量) |
15/pk |
|
99011 |
真空/正压两用泵，无油 |
1/pk |
|
99013 |
抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞) |
1/pk |
|
30039 |
FitMax针头式过滤器 Nylon |
13 mm, 0.22 μm 100/pk |
|
标准品 |
||
|
12-MET-12133A-100MG |
氨甲基膦酸 [1066-51-9] |
100 mg |
|
46010 |
草甘膦 [1071-83-6] |
100 mg |
|
色谱柱及保护柱 |
||
|
99302 |
Dikma Polyamino HILIC |
150 x 2.0 mm, 5 μm |
|
HPLC溶剂·缓冲盐·离子对试剂 |
||
|
50101 |
乙腈 HPLC级 |
4 L |
|
50102 |
甲醇 HPLC级 |
4 L |
|
50117 |
二氯甲烷 HPLC级 |
4 L |
|
50138 |
乙酸铵 HPLC级 |
100 g |
|
通用色谱产品 |
||
|
52401B |
瓶架/蓝色（现货） |
50孔 |
|
52401A |
瓶架/白色（现货） |
50孔 |
|
1034 |
样品瓶（棕色/螺纹） |
2 mL, 100/pk |
|
1035 |
样品瓶盖/含垫（已经组装） |
100/pk |
|
H80465 |
HPLC 进样针 |
25 μL |
红色产品货号#30039、#1034、#1035火热促销中
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