2022-02-22
2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比，在畜禽肉及副产品项下多个产品种类中新增了检测方法：《GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》，该方法可同时检测三大类兽药残留。
迪马科技参考此标准，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定的方法，利用Mcllvaine缓冲液(pH 5.0)和磷酸盐缓冲液提取，ProElut PLS净化，Leapsil C18色谱柱分离检测；定量限与标准方法一致，为10.0 μg/kg；回收率在60%-110%之间。方法实验过程基本参考标准，部分进行优化。对比国标方法，本方案具有回收率高、方法稳定性好等优点；适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。
参考《GB 31658.17-2021食品安全国家标准-动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》
1、适用范围
本方案适用于牛、羊、猪、和鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留的检测。方法定量限是10.0 μg/kg。
2、标准品配制
1. 单标储备液，分别称取适量四环素、土霉素、金霉素、多西环素、噁喹酸、氟甲喹、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星、二氟沙星，用甲醇配制成1.0 mg/mL的单标储备液；
2. 16种磺胺混标储备液100.0 μg/mL：包含乙酰磺胺、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺间二甲基嘧啶，每个目标物浓度都是100 μg/mL；
3. 13种喹诺酮混标储备液：分别称取适量喹诺酮单标储备液用甲醇定容定容到10 mL,得到50.0 μg/mL的喹诺酮混标储备溶液；
4. 4种四环素类混标储备液：分别称取适量四环素类单标单标储备液用甲醇定容定容到10 mL,得到100.0 μg/mL的四环素类混标储备溶液；
5. 33种兽药混标储备液1.0 μg/mL：分别取(2)(3)(4)步骤的混标储备液适量，用乙腈配制成1.0 μg/mL；
6. 33种兽药混标中间液0.1 μg/mL：取适量(5) 33种混标储备液，用乙腈配制成0.1 μg/mL。
3、提取
1. 称取样品1.0 g于50 mL离心管中，加Mcllvaine-NaEDTA缓冲液*(pH 5) 8 mL，涡旋5 min， 6000 rpm离心2 min，收集上清液；
2. 残渣中加磷酸盐缓冲液* 8 mL，重复提取一次，合并提取液，混匀，备用。
* Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)10.9 g、柠檬酸(C6H8O7·H2O)12.9 g、乙二胺四乙酸二钠盐39.2 g，加水900 mL，用1 mol/L的氢氧化钠溶液调pH至5±0.2，用水稀释至1000 mL。
* 磷酸盐缓冲液：取0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液 190 mL，用0.05 mol/L 磷酸氢二钠溶液稀释至1000 mL。
4、净化——ProElut PLS 200 mg/6 mL (Cat.#: 68012)
|
(1)活 化： |
过柱前，柱中加入0.1 g脱脂棉，再依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液； |
|
(2)上 样： |
加入备用液，弃去流出液； |
|
(3)淋 洗： |
依次用5 mL水、5 mL 5%甲醇水溶液淋洗，弃去流出液； |
|
(4)洗 脱： |
向柱中加入2.5 mL甲醇，然后再加入2.5 mL 2%氨水甲醇，收集流出液； |
|
(5)重新溶解： |
将洗脱液在55 ℃下氮吹至0.5 mL，加入0.5%甲酸水，并定容至1 mL，过0.22 µm Nylon 滤膜(Cat.#: 37177)，上机分析。 |
*注：同方法制备基质匹配标准溶液。
5、分析条件
UPLC 条件
色谱柱：Leapsil C18 100 x 2.1 mm, 2.7 μm (Cat.#：86005)
流 速：0.3 mL/min 进样量：5 μL 柱 温：40 ℃
流动相：A：0.5%甲酸水溶液
B：0.1%甲酸乙腈
梯度设置
|
时间/Min. |
0 |
2 |
7 |
7.5 |
9 |
9.5 |
15 |
|
A(%) |
90 |
90 |
40 |
10 |
10 |
90 |
90 |
|
B(%) |
10 |
10 |
60 |
90 |
90 |
10 |
10 |
质谱条件：
|
电离模式：ESI |
扫描方式：正离子扫描 |
|
检测方式：多反应监测 |
电喷雾电压：5500 V |
|
雾化气压力：50 psi |
辅助气压力：50 psi |
|
气帘气压力：20 psi |
离子源温度：500 ℃ |
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
|
项目 |
定性离子对 (m/z) (母离子/子离子) |
定量离子对 (m/z) (母离子/子离子) |
去簇电压 /V |
碰撞气能量 /eV |
|
乙酰磺胺 |
215.2/156 |
215.2/156 |
60 |
13 |
|
215.2/108.2 |
24 |
|||
|
磺胺吡啶 |
250.2/156.1 |
250.2/156.1 |
53 |
20 |
|
250.2/184 |
21 |
|||
|
磺胺嘧啶 |
251.1/156 |
251.1/156 |
60 |
21 |
|
251.1/184.9 |
28 |
|||
|
磺胺甲噁唑 |
254/156 |
254/156 |
70 |
22 |
|
254/108.1 |
32 |
|||
|
磺胺噻唑 |
256.1/156 |
256.1/156 |
71 |
21 |
|
256.1/108.1 |
34 |
|||
|
磺胺甲嘧啶 |
265.1/156 |
265.1/156 |
82 |
22 |
|
265.1/172.1 |
22 |
|||
|
磺胺二甲异噁唑 |
268/156 |
268/156 |
60 |
18 |
|
268/113.1 |
20 |
|||
|
磺胺甲噻二唑 |
271.2/156 |
271.2/156 |
61 |
18 |
|
271.2/108.1 |
34 |
|||
|
磺胺二甲嘧啶 |
279.1/186 |
279.1/186 |
70 |
23 |
|
279.1/155.9 |
25 |
|||
|
279.1/124.1 |
30 |
|||
|
磺胺间甲氧嘧啶 |
281.1/156 |
281.1/156 |
70 |
23 |
|
281.1/108.1 |
34 |
|||
|
磺胺甲氧哒嗪 |
281/156.1 |
281/156.1 |
65 |
22 |
|
281/215.1 |
22 |
|||
|
磺胺对甲氧嘧啶 |
281/156 |
281/156 |
65 |
25 |
|
281/215 |
25 |
|||
|
磺胺氯哒嗪 |
285.1/156 |
285.1/156 |
48 |
20 |
|
285.1/108.1 |
34 |
|||
|
磺胺邻二甲氧嘧啶 |
311.2/156 |
311.2/156 |
80 |
23 |
|
311.2/108.1 |
35 |
|||
|
磺胺苯吡唑 |
315.1/158.2 |
315.1/158.2 |
70 |
38 |
|
315.1/160 |
29 |
|||
|
315.1/156.1 |
48 |
|||
|
磺胺间二甲基嘧啶 |
311.2/156.1 |
311.2/156.1 |
75 |
28 |
|
311.2/108.2 |
40 |
|||
|
噁喹酸 |
262/216 |
262/216 |
50 |
41 |
|
262/244.1 |
25 |
|||
|
氟甲喹 |
262/202 |
262/202 |
50 |
45 |
|
262/244 |
27 |
|||
|
诺氟沙星 |
320/276 |
320/276 |
45 |
26 |
|
320/233 |
36 |
|||
|
依诺沙星 |
321.3/303.2 |
321.3/303.2 |
79 |
26 |
|
321.3/232.1 |
45 |
|||
|
环丙沙星 |
332.2/288.2 |
332.2/288.2 |
80 |
23 |
|
332.2/245.2 |
30 |
|||
|
培氟沙星 |
334.2/316.1 |
334.2/316.1 |
84 |
25 |
|
334.2/290.2 |
24 |
|||
|
洛美沙星 |
352.3/265.1 |
352.3/265.1 |
93 |
30 |
|
352.3/308.3 |
23 |
|||
|
达氟沙星 |
358.3/314.1 |
358.3/314.1 |
93 |
24 |
|
358.3/283.4 |
30 |
|||
|
恩诺沙星 |
360.3/316.1 |
360.3/316.1 |
80 |
26 |
|
360.3/316.1 |
26 |
|||
|
氧氟沙星 |
362.3/318.3 |
362.3/318.3 |
90 |
25 |
|
362.3/261.2 |
35 |
|||
|
麻保沙星 |
363.2/320.2 |
363.2/320.2 |
82 |
24 |
|
363.2/277.4 |
24 |
|||
|
沙拉沙星 |
386.2/342.2 |
386.2/342.2 |
92 |
24 |
|
386.2/299.2 |
35 |
|||
|
二氟沙星 |
400.2/356.2 |
400.2/356.2 |
100 |
27 |
|
400.2/299.3 |
37 |
|||
|
土霉素 |
461.3/426.1 |
461.3/426.1 |
78 |
25 |
|
461.3/443.3 |
17 |
|||
|
四环素 |
445.2/410.2 |
445.2/410.2 |
83 |
25 |
|
445.2/427.3 |
17 |
|||
|
金霉素 |
479.2/444.2 |
479.2/444.2 |
84 |
27 |
|
479.2/462.2 |
23 |
|||
|
多西环素 |
445.2/428.1 |
445.2/428.1 |
79 |
23 |
|
445.2/410.2 |
33 |
6、添加回收结果
鸡肉中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留回收率(%)及基质效应(%)
|
项目 |
添加水平10.0 μg/kg 加标量：中间液 0.1 μg/mL, 加100 μL |
添加水平100.0 μg/kg 加标量：中间液 1.0 μg/mL, 加100 μL |
基质效应 |
|
乙酰磺胺 |
85% |
75% |
44% |
|
磺胺吡啶 |
92% |
105% |
55% |
|
磺胺嘧啶 |
110% |
92% |
65% |
|
磺胺甲噁唑 |
89% |
92% |
27% |
|
磺胺噻唑 |
70% |
77% |
50% |
|
磺胺甲嘧啶 |
103% |
84% |
41% |
|
磺胺二甲异噁唑 |
85% |
85% |
29% |
|
磺胺甲噻二唑 |
110% |
79% |
33% |
|
磺胺二甲嘧啶 |
93% |
96% |
27% |
|
磺胺间甲氧嘧啶 |
96% |
81% |
31% |
|
磺胺甲氧哒嗪 |
99% |
82% |
31% |
|
磺胺对甲氧嘧啶 |
102% |
83% |
28% |
|
磺胺氯哒嗪 |
93% |
80% |
27% |
|
磺胺邻二甲氧嘧啶 |
75% |
66% |
23% |
|
磺胺苯吡唑 |
71% |
69% |
22% |
|
磺胺间二甲基嘧啶 |
69% |
67% |
22% |
|
噁喹酸 |
95% |
73% |
29% |
|
氟甲喹 |
81% |
78% |
58% |
|
诺氟沙星 |
86% |
69% |
55% |
|
依诺沙星 |
70% |
62% |
77% |
|
环丙沙星 |
74% |
62% |
50% |
|
培氟沙星 |
107% |
91% |
64% |
|
洛美沙星 |
106% |
78% |
39% |
|
达氟沙星 |
103% |
64% |
39% |
|
恩诺沙星 |
76% |
70% |
35% |
|
氧氟沙星 |
101% |
86% |
42% |
|
麻保沙星 |
87% |
80% |
42% |
|
沙拉沙星 |
69% |
65% |
32% |
|
二氟沙星 |
89% |
68% |
29% |
|
土霉素 |
104% |
108% |
83% |
|
四环素 |
92% |
67% |
71% |
|
金霉素 |
78% |
74% |
66% |
|
多西环素 |
79% |
90% |
46% |
猪肉中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留回收率(%)及基质效应(%)
|
项目 |
添加水平10.0 μg/kg 加标量：中间液 0.1 μg/mL, 加100 μL |
添加水平100.0 μg/kg 加标量：中间液 1.0 μg/mL, 加100 μL |
基质效应 |
|
乙酰磺胺 |
95% |
103% |
86% |
|
磺胺吡啶 |
85% |
96% |
91% |
|
磺胺嘧啶 |
87% |
94% |
93% |
|
磺胺甲噁唑 |
102% |
102% |
42% |
|
磺胺噻唑 |
93% |
99% |
82% |
|
磺胺甲嘧啶 |
81% |
105% |
74% |
|
磺胺二甲异噁唑 |
80% |
101% |
63% |
|
磺胺甲噻二唑 |
78% |
86% |
52% |
|
磺胺二甲嘧啶 |
108% |
94% |
53% |
|
磺胺间甲氧嘧啶 |
76% |
90% |
52% |
|
磺胺甲氧哒嗪 |
73% |
96% |
53% |
|
磺胺对甲氧嘧啶 |
83% |
99% |
53% |
|
磺胺氯哒嗪 |
72% |
102% |
48% |
|
磺胺邻二甲氧嘧啶 |
78% |
98% |
40% |
|
磺胺苯吡唑 |
74% |
91% |
38% |
|
磺胺间二甲基嘧啶 |
76% |
96% |
39% |
|
噁喹酸 |
77% |
97% |
61% |
|
氟甲喹 |
78% |
89% |
91% |
|
诺氟沙星 |
80% |
75% |
81% |
|
依诺沙星 |
68% |
69% |
150% |
|
环丙沙星 |
83% |
79% |
89% |
|
培氟沙星 |
91% |
100% |
96% |
|
洛美沙星 |
94% |
105% |
71% |
|
达氟沙星 |
98% |
104% |
93% |
|
恩诺沙星 |
95% |
103% |
83% |
|
氧氟沙星 |
85% |
85% |
78% |
|
麻保沙星 |
86% |
97% |
71% |
|
沙拉沙星 |
92% |
75% |
62% |
|
二氟沙星 |
67% |
102% |
66% |
|
土霉素 |
85% |
88% |
148% |
|
四环素 |
78% |
97% |
194% |
|
金霉素 |
61% |
71% |
143% |
|
多西环素 |
83% |
82% |
76% |
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图1 标准品四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图
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图2 鸡肉基质匹配四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图
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图3 猪肉基质匹配四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图
|
名称 |
规格 |
货号 |
|
标准品 |
||
|
19种磺胺类混标NEW |
100 μg/mL 在甲醇中, 1 mL/安瓿 |
47804 |
|
13种喹诺酮混标NEW |
100 μg/mL 在甲醇中, 1 mL/安瓿 |
47805 |
|
四环素[60-54-8] Tetracycline |
100 mg |
47806 |
|
金霉素[57-62-5] Chlortetracycline |
100 mg |
47807 |
|
土霉素[79-57-2] Oxytetracycline |
100 mg |
47808 |
|
多西环素[564-25-0] Doxycycline |
100 mg |
47809 |
|
样品前处理 |
||
|
亲水亲脂平衡柱ProElut PLS |
200 mg/6 mL 30/pkg |
68012 |
|
12管防交叉污染真空SPE萃取装置 |
12位 |
244358 |
|
1,3,6 mL柱管通用连接器 |
15/pk |
4803 |
|
考克(控制流量) |
15/pk |
4806 |
|
真空/正压两用泵，无油 |
1/pk |
99011 |
|
抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞) |
1/pk |
99013 |
|
ProMax针头式过滤器 Nylon |
13 mm, 0.22 μm 100/pk |
37177 |
|
色谱柱 |
||
|
HPLC/UPLC兼容色谱柱 Leapsil C18 |
100 x 2.1 mm, 2.7 µm |
86005 |
| UPLC色谱柱Endeavorsil C18 | 50 x 2.1 mm, 1.8 μm | 87002 |
|
高纯试剂·缓冲盐 |
||
|
乙腈 HPLC级 |
4 L |
50101 |
|
乙腈 LC-MS级 |
4 L |
50163 |
|
甲醇 HPLC级 |
4 L |
50102 |
|
甲醇 LC-MS级 |
4 L |
50164 |
|
甲酸 HPLC级 |
50 mL |
50144 |
|
甲酸 LC-MS级 |
50 mL |
50153 |
|
磷酸氢二钠，无水，HPLC级 |
100 g |
50158 |
|
磷酸二氢钠，无水，HPLC级 |
100 g |
50157 |
|
通用消耗品 |
||
|
瓶架/白色 |
50孔 |
52401A |
|
瓶架/蓝色 |
50孔 |
52401B |
|
样品瓶 (棕色/螺纹) |
2 mL, 100/pk |
1034 |
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样品瓶盖/含垫 (已经组装) |
100/pk |
1035 |
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HPLC 进样针, 平头 |
25 μL |
H80465 |
红色产品货号#1034、#1035火热促销中……
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