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动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物多残留量的测定UPLC-MS/MS法 (GB 31658.17-2021) 解决方案

2022-02-22

        2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比,在畜禽肉及副产品项下多个产品种类中新增了检测方法:《GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》,该方法可同时检测三大类兽药残留。

        迪马科技参考此标准,建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定的方法,利用Mcllvaine缓冲液(pH 5.0)和磷酸盐缓冲液提取,ProElut PLS净化,Leapsil C18色谱柱分离检测;定量限与标准方法一致,为10.0 μg/kg;回收率在60%-110%之间。方法实验过程基本参考标准,部分进行优化。对比国标方法,本方案具有回收率高、方法稳定性好等优点;适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

 

动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物多残留量的测定UPLC-MS/MS法 解决方案

参考《GB 31658.17-2021食品安全国家标准-动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》

1、适用范围

        本方案适用于牛、羊、猪、和鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留的检测。方法定量限是10.0 μg/kg。

 

2、标准品配制

1. 单标储备液,分别称取适量四环素、土霉素、金霉素、多西环素、噁喹酸、氟甲喹、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星、二氟沙星,用甲醇配制成1.0 mg/mL的单标储备液;

2. 16种磺胺混标储备液100.0 μg/mL:包含乙酰磺胺、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺间二甲基嘧啶,每个目标物浓度都是100 μg/mL;

3. 13种喹诺酮混标储备液:分别称取适量喹诺酮单标储备液用甲醇定容定容到10 mL,得到50.0 μg/mL的喹诺酮混标储备溶液;

4. 4种四环素类混标储备液:分别称取适量四环素类单标单标储备液用甲醇定容定容到10 mL,得到100.0 μg/mL的四环素类混标储备溶液;

5. 33种兽药混标储备液1.0 μg/mL:分别取(2)(3)(4)步骤的混标储备液适量,用乙腈配制成1.0 μg/mL;

6. 33种兽药混标中间液0.1 μg/mL:取适量(5) 33种混标储备液,用乙腈配制成0.1 μg/mL。

 

3、提取

1. 称取样品1.0 g于50 mL离心管中,加Mcllvaine-NaEDTA缓冲液*(pH 5) 8 mL,涡旋5 min,  6000 rpm离心2 min,收集上清液;

2. 残渣中加磷酸盐缓冲液* 8 mL,重复提取一次,合并提取液,混匀,备用。

* Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液:称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)10.9 g、柠檬酸(C6H8O7·H2O)12.9 g、乙二胺四乙酸二钠盐39.2 g,加水900 mL,用1 mol/L的氢氧化钠溶液调pH至5±0.2,用水稀释至1000 mL。

* 磷酸盐缓冲液:取0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液 190 mL,用0.05 mol/L 磷酸氢二钠溶液稀释至1000 mL。

 

4、净化——ProElut PLS  200 mg/6 mL (Cat.#: 68012)

(1)活    化:

过柱前,柱中加入0.1 g脱脂棉,再依次加入5 mL甲醇、5 mL水,弃去流出液;

(2)上    样:

加入备用液,弃去流出液;

(3)淋    洗:

依次用5 mL水、5 mL 5%甲醇水溶液淋洗,弃去流出液;

(4)洗    脱:

向柱中加入2.5 mL甲醇,然后再加入2.5 mL 2%氨水甲醇,收集流出液;

(5)重新溶解:

将洗脱液在55 ℃下氮吹至0.5 mL,加入0.5%甲酸水,并定容至1 mL,过0.22 µm Nylon 滤膜(Cat.#: 37177),上机分析。

*注:同方法制备基质匹配标准溶液。

 

5、分析条件

UPLC 条件                 

色谱柱:Leapsil C18 100 x 2.1 mm, 2.7 μm (Cat.#86005)

流  速:0.3 mL/min    进样量:5 μL   柱  温:40 ℃

流动相:A:0.5%甲酸水溶液

B:0.1%甲酸乙腈

梯度设置

时间/Min.

0

2

7

7.5

9

9.5

15

A(%)

90

90

40

10

10

90

90

B(%)

10

10

60

90

90

10

10

 

质谱条件:

电离模式:ESI

扫描方式:正离子扫描

检测方式:多反应监测

电喷雾电压:5500 V

雾化气压力:50 psi

辅助气压力:50 psi

气帘气压力:20 psi

离子源温度:500 ℃

 

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

项目

定性离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

定量离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

去簇电压

/V

碰撞气能量

/eV

乙酰磺胺

215.2/156

215.2/156

60

13

215.2/108.2

24

磺胺吡啶

250.2/156.1

250.2/156.1

53

20

250.2/184

21

磺胺嘧啶

251.1/156

251.1/156

60

21

251.1/184.9

28

磺胺甲噁唑

254/156

254/156

70

22

254/108.1

32

磺胺噻唑

256.1/156

256.1/156

71

21

256.1/108.1

34

磺胺甲嘧啶

265.1/156

265.1/156

82

22

265.1/172.1

22

磺胺二甲异噁唑

268/156

268/156

60

18

268/113.1

20

磺胺甲噻二唑

271.2/156

271.2/156

61

18

271.2/108.1

34

磺胺二甲嘧啶

279.1/186

279.1/186

70

23

279.1/155.9

25

279.1/124.1

30

磺胺间甲氧嘧啶

281.1/156

281.1/156

70

23

281.1/108.1

34

磺胺甲氧哒嗪

281/156.1

281/156.1

65

22

281/215.1

22

磺胺对甲氧嘧啶

281/156

281/156

65

25

281/215

25

磺胺氯哒嗪

285.1/156

285.1/156

48

20

285.1/108.1

34

磺胺邻二甲氧嘧啶

311.2/156

311.2/156

80

23

311.2/108.1

35

磺胺苯吡唑

315.1/158.2

315.1/158.2

70

38

315.1/160

29

315.1/156.1

48

磺胺间二甲基嘧啶

311.2/156.1

311.2/156.1

75

28

311.2/108.2

40

噁喹酸

262/216

262/216

50

41

262/244.1

25

氟甲喹

262/202

262/202

50

45

262/244

27

诺氟沙星

320/276

320/276

45

26

320/233

36

依诺沙星

321.3/303.2

321.3/303.2

79

26

321.3/232.1

45

环丙沙星

332.2/288.2

332.2/288.2

80

23

332.2/245.2

30

培氟沙星

334.2/316.1

334.2/316.1

84

25

334.2/290.2

24

洛美沙星

352.3/265.1

352.3/265.1

93

30

352.3/308.3

23

达氟沙星

358.3/314.1

358.3/314.1

93

24

358.3/283.4

30

恩诺沙星

360.3/316.1

360.3/316.1

80

26

360.3/316.1

26

氧氟沙星

362.3/318.3

362.3/318.3

90

25

362.3/261.2

35

麻保沙星

363.2/320.2

363.2/320.2

82

24

363.2/277.4

24

沙拉沙星

386.2/342.2

386.2/342.2

92

24

386.2/299.2

35

二氟沙星

400.2/356.2

400.2/356.2

100

27

400.2/299.3

37

土霉素

461.3/426.1

461.3/426.1

78

25

461.3/443.3

17

四环素

445.2/410.2

445.2/410.2

83

25

445.2/427.3

17

金霉素

479.2/444.2

479.2/444.2

84

27

479.2/462.2

23

多西环素

445.2/428.1

445.2/428.1

79

23

445.2/410.2

33

 

6、添加回收结果

鸡肉中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留回收率(%)及基质效应(%)

项目

添加水平10.0 μg/kg

加标量:中间液 0.1 μg/mL, 加100 μL

添加水平100.0 μg/kg

加标量:中间液 1.0 μg/mL, 加100 μL

基质效应

乙酰磺胺

85%

75%

44%

磺胺吡啶

92%

105%

55%

磺胺嘧啶

110%

92%

65%

磺胺甲噁唑

89%

92%

27%

磺胺噻唑

70%

77%

50%

磺胺甲嘧啶

103%

84%

41%

磺胺二甲异噁唑

85%

85%

29%

磺胺甲噻二唑

110%

79%

33%

磺胺二甲嘧啶

93%

96%

27%

磺胺间甲氧嘧啶

96%

81%

31%

磺胺甲氧哒嗪

99%

82%

31%

磺胺对甲氧嘧啶

102%

83%

28%

磺胺氯哒嗪

93%

80%

27%

磺胺邻二甲氧嘧啶

75%

66%

23%

磺胺苯吡唑

71%

69%

22%

磺胺间二甲基嘧啶

69%

67%

22%

噁喹酸

95%

73%

29%

氟甲喹

81%

78%

58%

诺氟沙星

86%

69%

55%

依诺沙星

70%

62%

77%

环丙沙星

74%

62%

50%

培氟沙星

107%

91%

64%

洛美沙星

106%

78%

39%

达氟沙星

103%

64%

39%

恩诺沙星

76%

70%

35%

氧氟沙星

101%

86%

42%

麻保沙星

87%

80%

42%

沙拉沙星

69%

65%

32%

二氟沙星

89%

68%

29%

土霉素

104%

108%

83%

四环素

92%

67%

71%

金霉素

78%

74%

66%

多西环素

79%

90%

46%

 

 

猪肉中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留回收率(%)及基质效应(%)

项目

添加水平10.0 μg/kg

加标量:中间液 0.1 μg/mL, 加100 μL

添加水平100.0 μg/kg

加标量:中间液 1.0 μg/mL, 加100 μL

基质效应

乙酰磺胺

95%

103%

86%

磺胺吡啶

85%

96%

91%

磺胺嘧啶

87%

94%

93%

磺胺甲噁唑

102%

102%

42%

磺胺噻唑

93%

99%

82%

磺胺甲嘧啶

81%

105%

74%

磺胺二甲异噁唑

80%

101%

63%

磺胺甲噻二唑

78%

86%

52%

磺胺二甲嘧啶

108%

94%

53%

磺胺间甲氧嘧啶

76%

90%

52%

磺胺甲氧哒嗪

73%

96%

53%

磺胺对甲氧嘧啶

83%

99%

53%

磺胺氯哒嗪

72%

102%

48%

磺胺邻二甲氧嘧啶

78%

98%

40%

磺胺苯吡唑

74%

91%

38%

磺胺间二甲基嘧啶

76%

96%

39%

噁喹酸

77%

97%

61%

氟甲喹

78%

89%

91%

诺氟沙星

80%

75%

81%

依诺沙星

68%

69%

150%

环丙沙星

83%

79%

89%

培氟沙星

91%

100%

96%

洛美沙星

94%

105%

71%

达氟沙星

98%

104%

93%

恩诺沙星

95%

103%

83%

氧氟沙星

85%

85%

78%

麻保沙星

86%

97%

71%

沙拉沙星

92%

75%

62%

二氟沙星

67%

102%

66%

土霉素

85%

88%

148%

四环素

78%

97%

194%

金霉素

61%

71%

143%

多西环素

83%

82%

76%

 

 

图1 标准品四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图

 

图2 鸡肉基质匹配四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图

 

图3 猪肉基质匹配四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图

 

相关产品信息

名称

规格

货号

标准品

19种磺胺类混标NEW

100 μg/mL 在甲醇中, 1 mL/安瓿

47804

13种喹诺酮混标NEW

100 μg/mL 在甲醇中, 1 mL/安瓿

47805

四环素[60-54-8]  Tetracycline 

100 mg

47806

金霉素[57-62-5]  Chlortetracycline 

100 mg

47807

土霉素[79-57-2] Oxytetracycline 

100 mg

47808

多西环素[564-25-0] Doxycycline 

100 mg

47809

样品前处理

亲水亲脂平衡柱ProElut PLS

200 mg/6 mL 30/pkg

68012

12管防交叉污染真空SPE萃取装置

12位

244358

1,3,6 mL柱管通用连接器

15/pk

4803

考克(控制流量)

15/pk

4806

真空/正压两用泵,无油

1/pk

99011

抽滤瓶套装

(包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞)

1/pk

99013

ProMax针头式过滤器 Nylon

13 mm, 0.22 μm 100/pk

37177

色谱柱

HPLC/UPLC兼容色谱柱 Leapsil C18

100 x 2.1 mm, 2.7 µm

86005

UPLC色谱柱Endeavorsil C18 50 x 2.1 mm, 1.8 μm 87002

高纯试剂·缓冲盐

乙腈 HPLC级

4 L

50101

乙腈 LC-MS级

4 L

50163

甲醇 HPLC级

4 L

50102

甲醇 LC-MS级

4 L

50164

甲酸 HPLC级

50 mL

50144

甲酸 LC-MS级

50 mL

50153

磷酸氢二钠,无水,HPLC级

100 g

50158

磷酸二氢钠,无水,HPLC级

100 g

50157

通用消耗品

瓶架/白色

50孔

52401A

瓶架/蓝色

50孔

52401B

样品瓶 (棕色/螺纹)

2 mL, 100/pk

1034

样品瓶盖/含垫 (已经组装)

100/pk

1035

HPLC 进样针, 平头

25 μL

H80465

红色产品货号#1034#1035火热促销中……

 

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