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水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定 UPLC-MSMS法 (GB 31656.11-2021) 解决方案

2022-02-24

参考《GB 31656.11-2021 食品安全国家标准 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定》


        2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比,水产品项下淡水虾、海水鱼、海水虾的检验项目中新增了GB 31656.11(第二法)液相色谱-串联质谱法,同时,在3.5.2.5中指定其为2022年2月1日(含)起的指定检验方法。《GB 31656.11-2021 食品安全国家标准 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定》为2021年9月16日发布的中华人民共和国农业农村部公告 第388号36项食品安全国家标准之一。


        迪马科技参考GB 31656.11-2021标准,建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定水产品中4种四环素类药物残留量检测的方法,利用Mcllvaine缓冲液(pH 4.0)提取,ProElut PLS净化,Leapsil C18色谱柱分离检测;定量限与标准方法一致,为10.0 μg/kg;回收率在70%-110%之间。
本方案具有提取方法简单、回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点,适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定 UPLC-MS/MS 解决方案

1、适用范围

        本方案适用于鱼、虾、蟹、鳖及海参等水产品可食组织中土霉素、四环金、金霉素和多西环素残留量的检测。

 

2、标准品配制

1单标储备液:分别称取适量盐酸四环素、盐酸土霉素、盐酸金霉素及盐酸多西环素,用甲醇配制成1.0 mg/mL的单标储备液;

2. 混合标准中间液:分别吸取适量单标储备液,用甲醇配制成1.0 μg/mL和0.1 μg/mL的中间液。

 

3、提取

1. 取2.0 g样品于50 mL离心管中,加入6 mL Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液*和2 mL乙酸铅溶液*,涡旋混合1 min,超声10 min,8000 rpm离心2 min;

2. 取出上清液,残渣分别用Na2EDTA- Mcllvaine缓冲液5 mL提取两次;

3. 合并三次提取液,并用Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液定容至20 mL;

4. 加入10 mL正己烷,涡旋混合1 min,8000 rpm离心2 min,取下层清液10 mL待净化。

* Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH 4.0):称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 27.6 g、柠檬酸(C6H8O7·H2O) 12.9 g、乙二胺四乙酸二钠盐

37.2 g,用水溶解后稀释并定容至1000 mL。

* 乙酸铅溶液:称取20 g乙酸铅,用水定容至1000 mL。

 

4、净化——ProElut PLS  60 mg/3 mL (Cat.#: 68003)

(1)活    化:

依次用5 mL甲醇、5 mL水活化;

(2)上    样:

加入待净化液,弃去流出液;

(3)淋    洗:

依次用5 mL 水、5 mL 5%甲醇水淋洗,弃去流出液,小柱真空负压抽干5 min;

(4)洗    脱:

加入5 mL 乙酸乙酯-甲醇(1:9)溶液,推干小柱,接收全部流出液混匀;

(5)重新溶解:

将流出液在45 ℃下氮吹近干,用初始流动相定容至1 mL,过Nylon膜(Cat.#: 37177),供LC-MS/MS分析。

注:同方法制备基质匹配标准溶液。

 

5、分析条件

UPLC 条件                 

色谱柱:Leapsil C18, 100 x 2.1 mm 2.7 μm (Cat#86005)

流  速:0.2 mL/min    进样量:5 μL   柱  温:35 ℃

流动相:A:0.1%甲酸水溶液              B:乙腈

梯度设置

时间/Min.

0

0.5

3.5

4

6

7

A(%)

90

90

80

10

10

90

B(%)

10

10

20

90

90

10

 

质谱条件

电离模式:ESI

扫描方式:正离子扫描

检测方式:多反应监测

电喷雾电压:5500 V

雾化气压力:50 psi

辅助气压力:50 psi

气帘气压力:20 psi

离子源温度:500 ℃

 

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

药物名称

定性离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

定量离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

DP

CE

四环素

445.2/410.2

445.2/410.2

83

25

445.2/427.3

17

土霉素

461.3/426.1

461.3/426.1

78

25

461.3/443.3

17

金霉素

479.2/444.2

479.2/444.2

84

27

479.2/462.2

23

多西环素

445.2/428.1

445.2/428.1

79

23

445.2/410.2

33

 

6、添加回收结果

龙利鱼中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)

目标物

添加水平10.0 μg/kg

加标量:混合中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL

添加水平100.0 μg/kg

加标量:混合中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL

基质效应

四环素

93%

89%

113%

土霉素

104%

89%

115%

金霉素

86%

83%

93%

多西环素

83%

85%

78%

 

 

草鱼中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)

目标物

添加水平10.0 μg/kg

加标量:中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL

添加水平100.0 μg/kg

加标量:中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL

基质效应

四环素

108%

82%

94%

土霉素

92%

87%

109%

金霉素

98%

78%

70%

多西环素

97%

82%

60%

 

 

海水虾中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)

目标物

添加水平10.0 μg/kg

加标量:混合中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL

添加水平100.0 μg/kg

加标量:混合中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL

基质效应

四环素

84%

85%

124%

土霉素

96%

95%

107%

金霉素

86%

82%

79%

多西环素

84%

87%

74%

 

淡水虾中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果(%)

目标物

添加水平10.0 μg/kg

加标量:中间液 0.1 μg/mL, 加200 μL

添加水平100.0 μg/kg

加标量:中间液 1.0 μg/mL, 加200 μL

基质效应

四环素

109%

93%

62%

土霉素

82%

98%

52%

金霉素

91%

86%

33%

多西环素

96%

89%

31%

 

标准品四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图

 

龙利鱼基质匹配四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图

 

草鱼基质匹配四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图

 

海水虾基质匹配四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图

 

淡水虾基质匹配四环素类药物(10.0 μg/L)检测的MRM图

 

龙利鱼基质匹配标准品四环素类(10.0 μg/L)检测的XIC图

 

草鱼基质匹配标准品四环素类(10.0 μg/L)检测的XIC图

 

海水虾基质匹配标准品四环素类(10.0 μg/L)检测的XIC图

 

淡水虾基质匹配标准品四环素类(10.0 μg/L)检测的XIC图

 

 

相关产品信息

名称

规格

货号

标准品

四环素[60-54-8] Tetracycline

100 mg

47806

金霉素[57-62-5] Chlortetracycline

100 mg

47807

土霉素[79-57-2] Oxytetracycline

100 mg

47808

多西环素[564-25-0] Doxycycline

100 mg

47809

样品前处理

亲水亲脂平衡柱ProElut PLS

60 mg/3 mL 50/pkg

68003

12管防交叉污染真空SPE萃取装置

12位

244358

1,3,6 mL柱管通用连接器

15/pk

4803

考克(控制流量)

15/pk

4806

真空/正压两用泵,无油

1/pk

99011

抽滤瓶套装(包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞)

1/pk

99013

ProMax针头式过滤器 Nylon

13 mm, 0.22 μm 100/pk

37177

色谱柱

HPLC/UPLC兼容色谱柱 Leapsil C18

100 x 2.1 mm, 2.7 µm

86005

高纯试剂·缓冲盐

乙腈 HPLC级

4 L

50101

乙腈 LC-MS级

4 L

50163

甲醇 HPLC级

4 L

50102

甲醇 LC-MS级

4 L

50164

正己烷HPLC级

4 L

50115

乙酸乙酯 HPLC级

4 L

50104

甲酸 HPLC级

50 mL

50144

甲酸 LC-MS级

50 mL

50153

磷酸氢二钠,无水,HPLC级

100 g

50158

通用消耗品

瓶架/白色

50孔

52401A

瓶架/蓝色

50孔

52401B

样品瓶 (棕色/螺纹)

2 mL, 100/pk

1034

样品瓶盖/含垫 (已经组装)

100/pk

1035

HPLC 进样针, 平头

10 μL

H80365

红色产品货号#1034、#1035火热促销中……

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