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动物源食品中利巴韦林的检测UPLC-MS/MS法解决方案

2021-12-16

        利巴韦林又名病毒唑、三氮唑核苷、尼斯可等,是广谱强效的抗病毒药物,因具有溶血性贫血、遗传毒性和生殖毒性等副作用,我国早在2005年就明令禁止利巴韦林等人用抗病毒药兽用。近年来利巴韦林也成为国家食品安全监督抽检的重要项目。

 

        目前利巴韦林常用的检测方法为《SN/T 4519-2016 出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》,迪马科技参考相关标准,优化方法过程,采用新推出的PBA固相萃取柱产品,结合耐纯水的Spursil C18-EP极性改性液相色谱柱,推出鸡肉和鸡肝中利巴韦林检测方法。该方法具有回收率高、稳定性好、净化效果优异等特点,可供广大分析工作者参考。

 

1、适用范围

        本方案适用于鸡肉、鸡肝等动物源性食品中利巴韦林的检测。

 

2、标准品配制

(1) 利巴韦林储备液1.0 mg/mL:准确称取适量标准品,用甲醇配制成利巴韦林1.0 mg/mL的储备液;

(2) 利巴韦林中间液:分别吸取适量单标储备液,用甲醇配制成1.0 μg/mL 和0.05 μg/mL的中间液;

(3) 利巴韦林-13C5内标储备液100.0 μg/mL:利巴韦林-13C5,甲醇配制,直接购买的储备液;

(4) 利巴韦林-13C5内标中间液:吸取适量内标储备液,用甲醇配制成0.1 μg/mL中间液。

 

3、提取

1. 称取5 g样品,加入利巴韦林-13C5内标中间液100 μL,12 mL三氯乙酸提取液(pH 4.8)*,和2.5 mL乙腈,振荡提取10 min,6000 rpm离心2 min,取上清液;

2. 下层残渣再用10 mL三氯乙酸提取液(pH 4.8),重复提取一次;

3. 合并两次提取液,并定容至25 mL,取出5 mL。

*三氯乙酸提取液(pH 4.8):称20 g三氯乙酸,加入950 mL水溶解,用氨水调节pH至4.8,用水定容至1000 mL。

 

4、酶解

1. 5 mL提取液加入1 mL 2 mol/L乙酸铵(pH 4.8)*,加入100 μL酶*,涡旋混合1 min,放入37 ℃烘箱加热反应2 h。

2. 酶解完成后,拿出冷却到室温,加入氨水,调节pH至8.5,混匀,6000 rpm离心2 min,取出上清液待净化。

*2 mol/L乙酸铵(pH 4.8):称取7.7 g乙酸铵,加入45 mL水溶解,然后用乙酸调节pH至4.8;

*酶溶液的配制:固体酶制剂:酶活度:10.4 u/mg磷酸酯酶,取适量酶制剂,用水稀释至酶活0.04 u/mL。

 

5、净化——ProElut PBA  100 mg/3 mL (Cat.# 68403)

(1)活    化:

依次用3 mL乙腈、3 mL乙腈-1%甲酸水*、3 mL乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5)*活化;

(2)上    样:

加入待净化液,弃去流出液;

(3)淋    洗:

依次用5 mL 10%乙腈-乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5)*、2 mL 5%氨水甲醇淋洗,弃去流出液,小柱真空负压抽干0.5 min;

(4)洗    脱:

加入2 mL 0.5%甲酸水,抽干小柱,接收全部流出液混匀,过Nylon膜(Cat#:37177)上机分析。

*乙腈-1%甲酸水:乙腈:1%甲酸水(体积比3:1);

*乙酸铵缓冲溶液(pH8.5):称取3.85 g乙酸铵,加入180 mL水溶解,然后用氨水调节pH至8.5;

*10%乙腈-乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5):乙腈:pH 8.5乙酸铵缓冲溶液(体积比1:9)。

 

6、分析条件

UPLC 条件

色谱柱:Spursil C18-EP, 150 x 2.1 mm, 3 μm  (Cat#82113)

流  速:0.4 mL/min     进样量:10 μL     柱 温:35 ℃

流动相:A: 0.2%甲酸水                  B: 乙腈

梯度

时间(min)

0

2

4.5

6

7

7.5

15

A(%)

100

100

80

40

40

100

100

B(%)

0

0

20

60

60

0

0

 

质谱条件

电离模式:ESI                           扫描方式:正离子扫描

检测方式:多反应监测                电喷雾电压:5500 V

雾化气压力:50 psi                    辅助气压力:50 psi

气帘气压力:20 psi                    离子源温度:500 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

药物名称

定性离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

定量离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

碰撞气能量/eV

去簇电压/V

利巴韦林

245.2/113.1

245.2/113.1

11

64

245.2/96.2

15

利巴韦林-13C5

250.3/113.3

11

62

 

7、添加回收结果

动物源性食品中利巴韦林检测的添加回收结果(%)

基质

添加水平1.0 μg/kg

添加水平20.0 μg/kg

加标量:利巴韦林中间液0.05 μg/mL, 加100 μL

加标量:利巴韦林中间液1.0 μg/mL, 加100 μL

鸡肉

107.1

98.6

鸡肝

108.2

105.3

 

相关产品信息

货号

名称

规格

样品前处理

68403

苯硼酸固相萃取柱ProElut PBA

100 mg/3 mL 50/pkg

244358

12管防交叉污染真空SPE萃取装置

12位

4803

1,3,6 mL柱管通用连接器

15/pk

4806

考克(控制流量)

15/pk

99011

真空/正压两用泵,无油

1/pk

99013

抽滤瓶套装

(包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞)

1/pk

37177

ProMax针头式过滤器 Nylon

13 mm,0.22 μm 100/pk

色谱柱

82113

极性改性反相色谱柱 Spursil C18-EP

150 x 2.1 mm, 3 µm

HPLC溶剂

50101

乙腈 HPLC级

4 L

50163

乙腈 LC-MS级

4 L

50102

甲醇 HPLC级

4 L

50164

甲醇 LC-MS级

4 L

50144

甲酸 HPLC级

50 mL

50153

甲酸 LC-MS级

50 mL

50132

乙酸 HPLC级

50 mL

50138

乙酸铵HPLC级

100 g

通用色谱产品

52401A

瓶架/白色

50孔

52401B

瓶架/蓝色

50孔

1034

样品瓶 (棕色/螺纹)

2 mL, 100/pk

1035

样品瓶盖/含垫 (已经组装)

100/pk

H80465

HPLC 进样针, 平头

25 μL

红色产品货号#1034、#1035火热促销中……

 

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