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动物性食品中氯霉素残留量的测定 UPLC-MSMS法 (GB 31656.2-2021) 解决方案

2022-03-21

参考《GB 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》

        2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比,畜禽肉及副产品和水产品项下的氯霉素检验项目中新增了《GB 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》,同时,在1.5.2.4及3.5.2.5中指定其为2022年2月1日(含)起的指定检验方法。

        迪马科技参考GB 31658.2-2021建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定动物性食品中氯霉素残留量,使用乙腈提取,乙酸乙酯反萃,Diamonsil C18(2)色谱柱分离检测;定量限与标准方法一致,为0.1 μg/kg;回收率在80%-110%之间。实验过程基本参考标准,本方法回收率高,稳定性好,通过对C18小柱的考察,最终采用ProElut C18-U净化。适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

动物性食品中氯霉素残留量的测定 UPLC-MSMS法 解决方案

1、适用范围

        本方案适用于猪肉、鸡肉、猪肝和鸡肝等样品中氯霉素残留量的检测。

 

2、标准品配制

(1)  氯霉素储备液0.1 mg/mL: 准确称取适量标准品,用甲醇配制成氯霉素0.1 mg/mL的储备液;

(2)  氯霉素标准工作液: 吸取适量氯霉素储备液,用流动相稀释成0.01 μg/mL和0.05 μg/mL;

(3)  氯霉素内标储备液100.0 μg/mL: 称取适量氯霉素-D5(CAS#: 202480-68-0),用甲醇配制;

(4)  氯霉素内标工作液: 吸取适量内标储备液,用流动相稀释成0.02 μg/mL。

 

3、提取

(1)  称取5.0 g样品,加入氯霉素内标工作液250 μL、5 mL乙腈和5 mL 4%氯化钠溶液,涡旋振荡2 min,

6000 rpm离心2 min,取上清液;

(2)  向下层残渣中继续加入5 mL乙腈和5 mL 4%氯化钠溶液,按照步骤(1)重复提取一次,合并两次上清液;

(3)  向上清液中加入正己烷5 mL,涡旋1 min,6000 rpm离心2 min,弃去上层液;再加入5 mL正己烷重复处理1次;

(4)  加水饱和的乙酸乙酯溶液5 mL,涡旋1 min,6000 rpm离心2 min,将上层清液转移到氮吹管中,重复提取一次,合并提取液;

(5)  40 ℃水浴下氮吹至近干(约0.2 mL),加5%乙腈水3 mL溶解,混匀,待净化。

 

4、净化——ProElut C18-U 500 mg/6 mL (Cat.#: 63505)

(1)活    化:

依次用10 mL甲醇、10 mL水活化;

(2)上    样:

加入待净化液,弃去流出液;控制流速1滴/秒;

(3)淋    洗:

加入6 mL水淋洗,弃去流出液;

(4)洗    脱:

加入4 mL 50%甲醇水, 控制流速1滴/秒,收集洗脱液;

(5)萃    取:

向洗脱液中加入水饱和的乙酸乙酯溶液4 mL,涡旋1 min,6000 rpm离心2 min,将上层清液转移到氮吹管中,重复提取一次,合并上层溶液。

(6)重新溶解:

将萃取得到的上层溶液在40 ℃水浴下氮吹至0.2 mL,用50%甲醇水定至1 mL,混匀,过Nylon膜(Cat.# 37177),上机分析。

*注: 同方法制备基质匹配标准溶液。

 

5、分析条件

UPLC 条件                 

色谱柱:  Diamonsil C18(2),150 x 3.0 mm,5 μm (Cat.#: 99628)

流  速:  0.4 mL/min    进样量:  5 μL   柱  温:  30 ℃

流动相:  A : 水       B: 甲醇         A:B=1:1

 

质谱条件

电离模式: ESI

扫描方式: 负离子扫描

检测方式: 多反应监测

电喷雾电压: -4500 V

雾化气压力: 50 psi

辅助气压力: 50 psi

气帘气压力: 20 psi

离子源温度: 500 ℃

 

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

化合物

定性离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

定量离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

CE

DP

氯霉素

320.9/151.9

320.9/151.9

-21

-76

320.9/256.7

-16

320.9/193.8

-17

氯霉素-D5

325.8/156.8

325.8/156.8

-22

-68

 

6、添加回收结果

动物性食品中氯霉素检测的添加回收结果(%)

基质

添加水平0.1 μg/kg

添加水平1.0 μg/kg

基质效应

(基质标/溶剂标)

加标量: 氯霉素工作液0.01 μg/mL,

加标量: 氯霉素中间液0.05 μg/mL,

 加50 μL

加100 μL

猪肉

106.1

103.2

105.9%

鸡肉

104.3

97.2

109.8%

鸡肝

97.4

97.1

86.7%

猪肝

95.1

98.7

99.6%

 
图1 氯霉素标准品(5.0 μg/L)检测的MRM图

 


图2 氯霉素标准品(0.5 μg/L)检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)


 
图3 氯霉素标准品(5.0 μg/L)检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)

 

   图4 猪肉(添加水平为0.1 μg/kg)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)


 
图5 猪肉(添加水平为1.0 μg/kg)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)


 
图6 猪肉(空白样品)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)

 


 
图7 鸡肉(添加水平为0.1 μg/kg)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)

 


  图8鸡肉(添加水平为1.0 μg/kg)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)


 
图9鸡肉(空白样品)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)
   
 
图10 鸡肝(添加水平为0.1 μg/kg)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)

 


图11鸡肝(添加水平为1.0 μg/kg)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)

 


图12鸡肝(空白样品)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素D5)

 


 
图13猪肝(添加水平为0.1 μg/kg)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)

 


图14猪肝(添加水平为1.0 μg/kg)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)

 


图15猪肝(空白样品)中氯霉素检测的XIC图(左图为氯霉素标准品,右图为氯霉素-D5)
 

相关产品信息

 

名称

规格

货号

标准品

氯霉素[56-75-7] Chloramphenicol

250 mg

12-N-14343-250MG

氯霉素D5[202480-68-0] Chloramphenicol D5

100 μg/mL 在乙腈中, 1 mL/安瓿

DRE-XA11120100AL

样品前处理

ProElut C18-U

500 mg/6 mL 30/pkg

63505

12管防交叉污染真空SPE萃取装置

12位

244358

1,3,6 mL柱管通用连接器

15/pk

4803

考克(控制流量)

15/pk

4806

真空/正压两用泵,无油

1/pk

99011

抽滤瓶套装(包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞)

1/pk

99013

ProMax针头式过滤器 Nylon

13 mm, 0.22 μm 100/pk

37177

色谱柱

Diamonsil C18(2)

150 x 3.0 mm,5 μm

99628

高纯试剂·缓冲盐

乙腈 HPLC级

4 L

50101

乙腈 LC-MS级

4 L

50163

甲醇 HPLC级

4 L

50102

甲醇 LC-MS级

4 L

50164

正己烷 HPLC级

4 L

50115

乙酸乙酯 HPLC级

4 L

50104

通用消耗品

瓶架/白色

50孔

52401A

瓶架/蓝色

50孔

52401B

样品瓶 (棕色/螺纹)

2 mL, 100/pk 

1034

样品瓶盖/含垫 (已经组装)

100/pk

1035

HPLC 进样针, 平头

25 μL

H80465

红色产品货号#1034#1035火热促销中……

 

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