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动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定UPLC-MSMS法(GB 31658.5-2021)解决方案

2022-03-29

参考《GB 31658.5-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》

        2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比,畜禽肉项下的氟苯尼考检验项目中新增了《GB 31658.5-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》,同时,在1.5.2.4中指定其为2022年2月1日(含)起的指定检验方法。

 

        迪马科技参考《GB 31658.5-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》,建立了测定动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺的SPE-UPLC-MS/MS法。利用氨化乙酸乙酯提取,ProElut PXC净化,Endeavorsil C18色谱柱分离检测, 定量限与标准方法一致,为10.0 μg/kg;回收率在70%-120%之间。本方案增加了水淋洗步骤,减小了基质效应,提高了灵敏度。同时流动相改乙酸铵为水相,提高了样品检测的稳定性。

 

        对比国标方法,本方案具有净化效果优异、灵敏度高、方法稳定性好等优点;适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

 

动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定

 

1、适用范围

        本方案适用于猪肉、鸡肉、猪肝中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的检测。

 

2、标准品配制

1. 单标储备液:分别称取适量氟苯尼考及氟苯尼考胺标准品,用甲醇配制成1.0 mg/mL的单标储备液;

2. 混合标准工作液:分别吸取适量单标储备液,用甲醇配制成10.0 μg/mL和1.0 μg/mL的混合标准工作液;

3. 氘代氯霉素储备液:准确称取适量氘代氯霉素,用甲醇配制成100.0 μg/mL,本标准溶液为直接购买;

4. 氘代氯霉素工作液:吸取适量氘代氯霉素储备液,用甲醇配制成100 ng/mL的氘代氯霉素工作液。

 

3、提取

1. 称取2 g样品,加入氘代氯霉素工作液100 μL,涡动混匀,静置15分钟;

2. 加入10 mL乙酸乙酯-氨水溶液*,涡旋混合1 min,6000 r/min离心2 min,取上清液于100 mL鸡心瓶中,残渣重复提取2次,合并3次提取液;

3. 向鸡心瓶中加入2 mL 5%乙酸水溶液*,混匀,于40 ℃水浴中减压旋蒸浓缩至1.5 mL;

4. 将浓缩液转至15 mL离心管中,用2 mL 5%乙酸水溶液洗涤鸡心瓶,洗涤液转至同一离心管中;

5. 继续向步骤(4)的离心管中加5 mL正己烷,涡旋混合1 min,6000 r/min离心2 min,弃上层,下层提取液重复脱脂一次,待净化。

* 乙酸乙酯-氨水溶液:取乙酸乙酯98 mL,加氨水2 mL,混匀

* 5%乙酸水溶液:取乙酸5 mL,用水溶解并稀释至100 mL

 

4、净化——ProElut PXC 60 mg/3 mL (Cat.#: 68203)

(1)活    化:

依次用2 mL甲醇、2 mL水活化;

(2)上    样:

加入待净化液,弃去流出液;

(3)淋    洗:

依次加入2 mL 5%乙酸水溶液、2 mL水淋洗,推干,弃去流出液;

(4)洗    脱:

加入5 mL 10%氨水甲醇,收集洗脱液;

(5)重新溶解:

将洗脱液在40 ℃水浴下氮吹近干,用 30%乙腈水定容至0.5 mL,混匀,过Nylon膜(Cat.# 37177),上机分析。

*注: 同方法制备基质匹配标准溶液。

 

5、分析条件

UPLC 条件                 

色谱柱:Endeavorsil C18,100 x 2.1 mm,1.8 μm  (Cat.#87003)

流  速:0.25 mL/min      进样量:5 μL    柱  温:40 ℃

流动相:     A :10mmol/L乙酸铵溶液       B:乙腈

时间(min)

0

0.5

2

4.5

6.5

16

A(%)

90

90

0

0

90

90

B(%)

10

10

100

100

10

10

 

质谱条件

电离模式: ESI

扫描方式: 正/负离子扫描

检测方式: 多反应监测

电喷雾电压: 5500V/-4500 V

雾化气压力: 50 psi

辅助气压力: 50 psi

气帘气压力: 20 psi

离子源温度: 500 ℃

 

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

化合物

定性离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

定量离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

DP

(V)

CE

(V)

氟苯尼考胺

247.9/230.0

247.9/230.0

65

14

247.9/130.1

31

氟苯尼考

355.8/335.9

355.8/335.9

-70

-13

355.8/185.0

-25

氯霉素-D5

325.8/156.8

325.8/156.8

-68

-22

 

6、添加回收结果

动物性食品中氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的添加回收结果及基质效应(%)

基质

添加水平10 μg/kg

加标量:混标1.0 μg/mL, 加20 μL

添加水平100 μg/kg

加标量:混标10.0 μg/mL,  加20 μL

基质效应

(基质标/溶剂标)

氟苯尼考胺

氟苯尼考

氟苯尼考胺

氟苯尼考

猪肉

81%

72%

113%

83%

68%

鸡肉

103%

94%

108%

96%

70%

猪肝

87%

71%

83%

70%

61%

 

图1 氟苯尼考胺及氟苯尼考标准品(40.0 ng/mL)检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图2 猪肉基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图3 猪肉(添加水平为10 μg/kg)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图4 猪肉(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图5 鸡肉基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图6 鸡肉(添加水平为10 μg/kg)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图7 鸡肉(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图8 猪肝基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图9 猪肝(添加水平为10 μg/kg)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图10 猪肝(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺,下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

 

图11 氟苯尼考胺及氟苯尼考标准品(40.0 ng/mL)检测的XIC图

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

  

图12 猪肉基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的XIC图(基质标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

  

  图13 猪肉(添加水平为10 μg/kg)中氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC图(前加标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

  

图14 猪肉(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC 图

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

  

图15 鸡肉基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的XIC图(基质标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

  

  图16 鸡肉(添加水平为10 μg/kg)中氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC图(前加标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

  

图17 鸡肉中(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC 图

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

  

图18 猪肝基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的XIC图(基质标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

  

  图19 猪肝(添加水平为10 μg/kg)中氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC图(前加标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

  

图20 猪肝中(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC 图

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

 

相关产品信息

 

名称

规格

货号

标准品

氟苯尼考[73231-34-2] Florfenicol

1 g

223120-1G

氟苯尼考胺[76639-93-5]Florfenicol-amine

10 mg

DRE-C13665020

氯霉素D5[202480-68-0] Chloramphenicol D5

100 μg/mL 在乙腈中, 1 mL/安瓿

DRE-XA11120100AL

样品前处理

ProElut PXC

60 mg/3 mL 50/pkg

68203

12管防交叉污染真空SPE萃取装置

12位

244358

1,3,6 mL柱管通用连接器

15/pk

4803

考克(控制流量)

15/pk

4806

真空/正压两用泵,无油

1/pk

99011

抽滤瓶套装(包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞)

1/pk

99013

ProMax针头式过滤器 Nylon

13 mm, 0.22 μm 100/pk

37177

色谱柱

Endeavorsil C18

100 x 2.1 mm, 1.8 μm

87003

高纯试剂·缓冲盐

乙腈 HPLC级

4 L

50101

乙腈 LC-MS级

4 L

50163

甲醇 HPLC级

4 L

50102

甲醇 LC-MS级

4 L

50164

乙酸乙酯 HPLC级

4 L

50104

乙酸 HPLC级

50 mL

50132

乙酸铵HPLC级

100 g

50138

通用消耗品

瓶架/白色

50孔

52401A

瓶架/蓝色

50孔

52401B

样品瓶 (棕色/螺纹)

2 mL, 100/pk

1034

样品瓶盖/含垫 (已经组装)

100/pk 

1035

HPLC 进样针, 平头

25 μL

H80465

红色产品货号#1034#1035火热促销中……

 

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