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水产品中氯丙嗪残留量的检测SPE-UPLC-MS/MS法(GB 31656.4-2021)解决方案

2022-04-24

参考《GB 31656.4-2021 食品安全国家标准 水产品中氯丙嗪残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》

        氯丙嗪是一种吩噻嗪类抗精神病药, 主要用于增强催眠、麻醉、镇静等。饲料中添加氯丙嗪对动物可起到间接催肥的作用。氯丙嗪主要在肝脏代谢, 在动物体内易产生药物残留, 残留的药物经食物链传递给人类, 给人类的身体健康带来很大危害。为加强兽药残留监控工作, 保证动物性食品卫生安全, 我国已发布标准《GB 31650-2019 食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》,其中规定氯丙嗪是允许作治疗用, 但不得在动物性食品中检出。

 

        2021年9月16日发布《农业农村部公告388号》36项兽残检测方法标准中,包含水产品中氯丙嗪的检测,迪马科技参考《GB 31656.4-2021 食品安全国家标准 水产品中氯丙嗪残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》,建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定水产品中氯丙嗪残留量,利用乙腈均质提取,ProElut PXC净化,Spursil C18色谱柱分离检测;定量限与标准方法一致,为1.0 μg/kg;回收率在70%-110%之间。方法实验过程基本参考标准。

 

        对比国标方法,本方案具有回收率高、净化效果优异、方法稳定性好、标准品峰形好等优点;适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

 

1、适用范围

        本方案适用于鱼、虾、蟹可食组织中氯丙嗪残留量的检测。

 

2、标准品配制

1. 氯丙嗪标准储备液1.0 mg/mL:准确称取适量标准品,用甲醇配制成氯丙嗪1.0 mg/mL的储备液;
2. 氯丙嗪中间液:吸取适量氯丙嗪标准储备液,用甲醇配制成0.1 μg/mL的中间液;
3. 氯丙嗪内标储备液100.0 μg/mL:氯丙嗪-D6,甲醇配制,直接购买的内标储备液;
4. 氯丙嗪内标中间液:吸取适量氯丙嗪内标储备液,用甲醇配制成0.2 μg/mL中间液。

 

3、提取

1. 称取5 g样品,加入氯丙嗪内标中间液50 μL和15 mL乙腈,均质1 min,超声10 min,6000 rpm离心2 min,取出上清液;

2. 另取10 mL乙腈清洗均质机30 s,洗液倒入下层残渣中,涡旋混合2 min,超声10 min,6000 rpm离心2 min,取出上清液;

3. 合并两次上清液,待净化。

 

4、净化——ProElut PXC 60 mg/3 mL (Cat.#: 68203)

(1)活    化:

依次用5 mL甲醇、5 mL水活化;

(2)上    样:

加入全部待净化液,弃去流出液,控制流速1滴/秒;

(3)淋    洗:

用5 mL甲醇淋洗,弃去流出液,推干小柱;

(4)洗    脱:

加入3 mL 5%氨水甲醇,推干小柱,接收全部流出液;

(5)重新溶解:

将流出液在40 ℃水浴下氮吹至0.2 mL,用定容液*定至1 mL,混匀,过Nylon膜(Cat.#: 37177),上机分析。

*定容液: 甲醇:2 mmol/L乙酸铵溶液(体积比3:7), (2 mmol/L乙酸铵溶液: 称取0.154 g乙酸铵,加入1 mL甲酸,定至1000 mL)。

 

5、分析条件   

UPLC 条件

色谱柱:Spursil C18, 100 x 2.1 mm, 3 μm  (Cat#:82012)

流  速:0.3 mL/min    进样量:5 μL    柱 温:30 ℃

流动相:A: 0.1%甲酸-2 mmol/L乙酸铵溶液     B: 甲醇

梯度

时间(min)

0

1

1.5

6.5

7

15

A(%)

15

15

10

10

15

15

B(%)

85

85

90

90

85

85

 

质谱条件

电离模式:ESI                           扫描方式:正离子扫描

检测方式:多反应监测                电喷雾电压:5500 V

雾化气压力:50 psi                    辅助气压力:50 psi

气帘气压力:20 psi                    离子源温度:500 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

药物名称

定性离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

定量离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

DP

(V)

CE

(V)

氯丙嗪

320.1/86.1

320.1/86.1

80

28

320.1/247.0

30

320.1/214.1

55

氯丙嗪-D6

326.3/92.1

326.3/92.1

80

30

 

6、添加回收结果

水产品中氯丙嗪检测的添加回收结果(%)

基质

添加水平1.0 μg/kg

加标量:氯丙嗪中间液0.1 μg/mL,

加50 μL

添加水平4.0 μg/kg

加标量:氯丙嗪中间液0.1 μg/mL,

加200 μL

空白含量

μg/kg

黄花鱼

104.9

95.1

0.20

海蟹

93.2

103.3

0.92

河蟹

102.1

91.8

海虾

96.8

83.7

淡水虾

104.2

98.5

1.25

 

图1 氯丙嗪标准品(20.0 μg/L)检测的MRM图

 

  图2 氯丙嗪标准品(5.0 μg/L)检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 

 
图3 氯丙嗪标准品(20.0 μg/L)检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)


 
图4 黄花鱼(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 


图5黄花鱼(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 


图6 黄花鱼(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)


 
图7 海蟹(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 


图8 海蟹(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 


图9 海蟹(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 


图10 河蟹(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 

  
图11 河蟹(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 


图12 河蟹(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 


图13 海水虾(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 


图14 海水虾(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

  


图15 海水虾(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 


  图16 淡水虾(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

  


图17 淡水虾(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

  


图18 淡水虾(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品,右图为氯丙嗪-D6)

 

相关产品信息

名称

规格

货号

样品前处理

ProElut PXC

60 mg/3 mL 50/pk

68203

12管防交叉污染真空SPE萃取装置

12位

244358

1,3,6 mL柱管通用连接器

15/pk

4803

考克(控制流量)

15/pk

4806

真空/正压两用泵,无油

1/pk

99011

抽滤瓶套装(包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞)

1/pk

99013

色谱柱

Spursil C18

100 x 2.1 mm, 3 μm

82012

高纯试剂·缓冲盐

乙腈 HPLC级

4 L

50101

乙腈 LC-MS级

4 L

50163

甲醇 HPLC级

4 L

50102

甲醇 LC-MS级

4 L

50164

甲酸 HPLC级

50 mL

50144

甲酸 LC-MS级

50 mL

50153

乙酸铵HPLC级

100 g

50138

通用消耗品

瓶架/白色

50孔

52401A

瓶架/蓝色

50孔

52401B

样品瓶 (棕色/螺纹)

2 mL, 100/pk

1034

样品瓶盖/含垫 (已经组装)

100/pk

1035

HPLC 进样针, 平头

10 μL

H80365

红色产品货号#1034#1035火热促销中……

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