2024-04-30
食品中4种抗氧化剂的测定
QuE-HPLC法
抗氧化剂是指能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂,作用机理主要为清除自由基,通过阻断或抑制油脂氧化过程中某一阶段,从而达到抑制油脂氧化的效果。
长期过量使用抗氧化剂会对人体健康造成危害,PG可导致肾脏受损或接触性皮炎等,TBHQ可能有致癌作用,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中,BHA和BHT分别被列为2类致癌物和3类致癌物。因此加强食用油及含油制品中PG、TBHQ、BHA和BHT的监管检测非常必要。
迪马科技依据《GB 2760-2024 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中规定油脂中PG、TBHQ、BHA、BHT的最大使用量,食品安全国家标准《GB 5009.32-2016 食品安全国家标准 食品中9种抗氧化剂的测定 第一法 高效液相色谱法》中定量限要求,参考国标建立了《食品中4种抗氧化剂的测定》,样品经乙腈饱和的正己烷溶解,使用正己烷饱和的乙腈提取,ProElut® QuEChERS AOD专用净化管净化,Diamonsil® Plus C18色谱柱分离检测;回收率在80%~110%之间。
本方案与国标相比,增加了提取使用的溶剂体积,这样可以更好地使抗氧化剂从油脂中提取出来,净化方式使用QuEChERS方法,在保证回收率和除油效果的同时,大大降低了净化所需时间。
本方案适用于花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、橄榄油、调和油、芝麻油、棕榈油、猪油、饼干、油炸果仁、麻花、方便面、薯片、火腿、燕麦片和花生罐头中PG、TBHQ、BHA和BHT的测定,定量限为20mg/kg。
(1) 单标储备液10000μg/mL,称取适量单标,用乙腈配制成10000μg/mL的单标储备液。
(2) 混标中间液2000μg/mL,分别吸取2mL单标储备液10000μg/mL于10mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配制成2000μg/mL的混标中间液。
(3) 混标中间液200μg/mL,分别吸取0.2mL单标储备液10000μg/mL于10mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配制成200μg/mL的混标中间液。
(1) 取1.0g样品,加入2.5mL正己烷(乙腈饱和),涡旋混合1min,使样品完全溶解,静置10min。加入20mL乙腈(正己烷饱和),涡旋振荡提取10min,静置5min,6000rpm离心5min,取出下层乙腈层;
(2) 向残渣中再加入20mL乙腈(正己烷饱和),按步骤(1)重复提取两次,合并三次提取液,混匀,取30mL,待净化。
注:火腿、花生罐头样品需加入2g无水硫酸钠使之分散,搅拌均匀后,再加入2.5mL正己烷(乙腈饱和过)。
ProElut® QuEChERS AOD净化管 (Cat.#: 64740)
将待净化液加入到50mL ProElut® QuEChERS AOD净化管中,涡旋混合1min,8000rpm离心5min,取15mL上清液于带刻度的玻璃离心管中,在40℃水浴下通入氮气吹至小于1mL,用乙腈定容至1mL,涡旋混匀,在-4℃下冷冻30min,取上层清液过0.45μm PTFE滤膜,上机分析。
色谱柱:Diamonsil® Plus C18, 250x4.6mm, 5μm (Cat.#: 99403)
流速:1.0mL/min
进样量:5μL
柱温:35℃
检测器:PDA 280nm
流动相:A:甲醇 B:0.5%甲酸水溶液
梯度设置:
花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、橄榄油、调和油、芝麻油、棕榈油、猪油、饼干、油炸果仁、麻花、方便面、薯片、火腿、燕麦片和花生罐头中PG、TBHQ、BHA和BHT的HPLC检测添加回收结果。
添加浓度400mg/kg(加标量: 2000μg/mL,0.2mL)
添加浓度200mg/kg(加标量: 2000μg/mL,0.1mL)
添加浓度20mg/kg(加标量: 200μg/mL,0.1mL)
做加标回收实验,样品提取时,涡旋混合的强度应在2000rpm以上,样品与提取溶剂充分地混合,有利于提高目标物的提取效率。
经QuEChERS净化后的上清液,需要浓缩至小于1mL,剩余的液体不宜过少,以免造成回收率损失。
棕榈油等样品,在提取、净化、浓缩、定容后,油脂会随着时间的推移逐渐析出,需要增加一个静置冷冻的过程,冷冻时间尝试过5、10、20、30、60分钟,随后取出过滤,上机分析,经过20小时静置后观察样品瓶中的液体状态,发现定容后的液体在5、10、20分钟后,样品瓶中的液体还会继续有油脂析出,冷冻30、60分钟后,样品瓶中的液体,油脂停止析出,最终确定冷冻时间30分钟为最佳时间。
固体类样品,当样品中含有少量水分时,需要加入无水硫酸钠将样品分散。相比国标方法中加入饱和氯化钠溶液,实验证明,加入无水硫酸钠,样品分散性更好。
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