2024-04-30
食品中4种抗氧化剂的测定
QuE-HPLC法
抗氧化剂是指能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂，作用机理主要为清除自由基，通过阻断或抑制油脂氧化过程中某一阶段，从而达到抑制油脂氧化的效果。
长期过量使用抗氧化剂会对人体健康造成危害，PG可导致肾脏受损或接触性皮炎等，TBHQ可能有致癌作用，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，BHA和BHT分别被列为2类致癌物和3类致癌物。因此加强食用油及含油制品中PG、TBHQ、BHA和BHT的监管检测非常必要。
迪马科技依据《GB 2760-2024 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中规定油脂中PG、TBHQ、BHA、BHT的最大使用量，食品安全国家标准《GB 5009.32-2016 食品安全国家标准 食品中9种抗氧化剂的测定 第一法 高效液相色谱法》中定量限要求，参考国标建立了《食品中4种抗氧化剂的测定》，样品经乙腈饱和的正己烷溶解，使用正己烷饱和的乙腈提取，ProElut® QuEChERS AOD专用净化管净化，Diamonsil® Plus C18色谱柱分离检测；回收率在80%~110%之间。
本方案与国标相比，增加了提取使用的溶剂体积，这样可以更好地使抗氧化剂从油脂中提取出来，净化方式使用QuEChERS方法，在保证回收率和除油效果的同时，大大降低了净化所需时间。
本方案适用于花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、橄榄油、调和油、芝麻油、棕榈油、猪油、饼干、油炸果仁、麻花、方便面、薯片、火腿、燕麦片和花生罐头中PG、TBHQ、BHA和BHT的测定，定量限为20mg/kg。
(1) 单标储备液10000μg/mL，称取适量单标，用乙腈配制成10000μg/mL的单标储备液。
(2) 混标中间液2000μg/mL，分别吸取2mL单标储备液10000μg/mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成2000μg/mL的混标中间液。
(3) 混标中间液200μg/mL，分别吸取0.2mL单标储备液10000μg/mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成200μg/mL的混标中间液。
(1) 取1.0g样品，加入2.5mL正己烷(乙腈饱和)，涡旋混合1min，使样品完全溶解，静置10min。加入20mL乙腈(正己烷饱和)，涡旋振荡提取10min，静置5min，6000rpm离心5min，取出下层乙腈层；
(2) 向残渣中再加入20mL乙腈(正己烷饱和)，按步骤(1)重复提取两次，合并三次提取液，混匀，取30mL，待净化。
注：火腿、花生罐头样品需加入2g无水硫酸钠使之分散，搅拌均匀后，再加入2.5mL正己烷(乙腈饱和过)。
ProElut® QuEChERS AOD净化管 (Cat.#: 64740)
将待净化液加入到50mL ProElut® QuEChERS AOD净化管中，涡旋混合1min，8000rpm离心5min，取15mL上清液于带刻度的玻璃离心管中，在40℃水浴下通入氮气吹至小于1mL，用乙腈定容至1mL，涡旋混匀，在-4℃下冷冻30min，取上层清液过0.45μm PTFE滤膜，上机分析。
色谱柱：Diamonsil® Plus C18, 250x4.6mm, 5μm (Cat.#: 99403)
流速：1.0mL/min
进样量：5μL
柱温：35℃
检测器：PDA 280nm
流动相：A:甲醇 B:0.5%甲酸水溶液
梯度设置：
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花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、橄榄油、调和油、芝麻油、棕榈油、猪油、饼干、油炸果仁、麻花、方便面、薯片、火腿、燕麦片和花生罐头中PG、TBHQ、BHA和BHT的HPLC检测添加回收结果。
添加浓度400mg/kg(加标量: 2000μg/mL,0.2mL)
添加浓度200mg/kg(加标量: 2000μg/mL,0.1mL)
添加浓度20mg/kg(加标量: 200μg/mL,0.1mL)
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做加标回收实验，样品提取时，涡旋混合的强度应在2000rpm以上，样品与提取溶剂充分地混合，有利于提高目标物的提取效率。
经QuEChERS净化后的上清液，需要浓缩至小于1mL，剩余的液体不宜过少，以免造成回收率损失。
棕榈油等样品，在提取、净化、浓缩、定容后，油脂会随着时间的推移逐渐析出，需要增加一个静置冷冻的过程，冷冻时间尝试过5、10、20、30、60分钟，随后取出过滤，上机分析，经过20小时静置后观察样品瓶中的液体状态，发现定容后的液体在5、10、20分钟后，样品瓶中的液体还会继续有油脂析出，冷冻30、60分钟后，样品瓶中的液体，油脂停止析出，最终确定冷冻时间30分钟为最佳时间。
固体类样品，当样品中含有少量水分时，需要加入无水硫酸钠将样品分散。相比国标方法中加入饱和氯化钠溶液，实验证明，加入无水硫酸钠，样品分散性更好。
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