丙烯酰胺是一种潜在致癌物，主要由食品在高温加工(如油炸、烘焙)过程中通过美拉德反应生成。自2002年瑞典科学家首次报道其在淀粉类食品中的存在后，丙烯酰胺的食品安全问题引发全球关注。世界卫生组织和国际癌症研究机构将其列为2A类致癌物，各国相继制定限量标准或监测指南，凸显其检测的必要性。

GB 5009.204-2025《食品安全国家标准 食品中丙烯酰胺的测定》于2025年9月2日发布，2026年3月2日实施，第一法采用液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)测定食品中丙烯酰胺，包括样品前处理、色谱分离条件、质谱检测参数及质量控制要求。其试样净化方法包括基质分散固相萃取法、固相萃取法、层析柱法，其中基质分散固相萃取法为本标准新增加的试样净化方法，可适用于所有食品。迪马科技在国标的基础上进行方法优化，省去水提后的离心操作，直接在水提溶液中加入乙腈进行萃取，并通过盐析(Cat.#: 64774S)实现相分离，减少转移损失，提高绝对回收率。然后在乙腈萃取液中加入正己烷，同样实现除脂目的。萃取液再经过基质分散净化管(Cat.#: 64771)净化，进一步去除干扰物，提升样本清洁度。

虽然前处理步骤已有效去除大部分基质干扰，但在实际LC-MS/MS分析中，对于复杂样品，如茶叶、咖啡等，部分共萃取杂质仍可能影响丙烯酰胺的准确测定。针对此问题，迪马科技根据标准对色谱柱规格等要求，最新推出Endeavorsil^® C18，150x3.0mm, 1.8μm (Cat.#: 87008)色谱柱产品，可有效分离目标物与杂质，保证了实验结果的准确程度。本方案以内标法进行定量分析，回收率在90-120%之间，可供广大客户参考使用。

本方案适用食品中丙烯酰胺的测定，定量限为10μg/kg。

(1) 丙烯酰胺标准储备液：准确称取适量丙烯酰胺标准品，用甲醇溶解配制成标准储备液1.0mg/mL；

(2) 丙烯酰胺中间液Ⅰ：准确吸取适量丙烯酰胺储备液，用纯水配制成丙烯酰胺中间液，浓度为10.0μg/mL；

(3) 丙烯酰胺中间液Ⅱ：准确吸取适量丙烯酰胺中间液Ⅰ，用纯水配制成丙烯酰胺中间液Ⅱ，浓度为1.0μg/mL；

(4) ¹³C₃-丙烯酰胺储备液：准确称取适量¹³C₃-丙烯酰胺标准品，用甲醇溶解配制成内标储备液0.1mg/mL；

(5) ¹³C₃-丙烯酰胺工作液：准确吸取适量¹³C₃-丙烯酰胺储备液，用纯水配制成¹³C₃-丙烯酰胺工作液，浓度为1.0μg/mL。

(1) 称取1g样品于50mL塑料离心管中，加入100μL ¹³C₃-丙烯酰胺工作液；

(2) 向离心管中加入10mL纯水，振摇30min；

(3) 再向离心管中加入10mL乙腈，振摇10min；

(4) 再向离心管中加入0.5g氯化钠和4g无水硫酸钠作为盐析剂(Cat.#: 64774S)，振摇5min；

(5) 8000rmp离心5min，移取上清至另一个离心管中，并加入5mL正己烷，振摇5min；

(6) 8000rmp离心5min，弃去上层正己烷，下层清液再用5mL正己烷重复萃取一次，下层清液备用。

取2mL备用液于基质分散净化管中ProElut^® QuE 15mL Tube，150mg PSA/150mg C18/20mg Carb/200mg SCX/150mg MgSO₄(Cat.#: 64771)，涡旋5min，8000rmp离心5min，取1mL上清液于40℃水浴氮吹浓缩近干，用0.20mL水复溶，经0.22μL水系滤膜过滤(Cat.#: 37177)，待测定。

UPLC条件

色谱柱：Endeavorsil^® C18，150x3.0mm，1.8μm (Cat.#: 87008)

流速：0.2mL/min

进样量：10μL

柱温：35℃

流动相：A:0.1% 甲酸水溶液 B:甲醇

梯度设置：

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表：