外用人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶（rhGM-CSF凝胶）系由重组大肠埃希菌表达、纯化后加入凝胶基质及辅料制成的外用制剂。2025年版《中国药典》三部收载该品种质量标准，涵盖生物学活性、鉴别、纯度、抑菌剂含量、装量及无菌检查等项目，其中纯度检查与抑菌剂含量测定属液相色谱控制的关键质量项目。

纯度检测采用体积排阻色谱（SEC）进行分子大小变异体分析，其难点在于：重组蛋白高级结构与活性密切关联，SEC需在温和生理条件下运行，对填料惰性与生物相容性要求极高；凝胶基质中羧甲基纤维素钠、甘油、聚山梨酯80等辅料易产生非特异性吸附或共洗脱，干扰测定准确性；SEC柱装填工艺及孔径均一性决定理论塔板数，该指标系药典系统适用性的硬性要求。

抑菌剂检查针对该品种唯一抑菌剂对羟基苯甲酸甲酯，药典规定采用反相液相色谱法。挑战在于：目标物含量低（约1 μg/mL），属痕量检测，基质中高浓度辅料易产生干扰，对色谱柱选择性与分离度要求较高；同时，对羟基苯甲酸甲酯极性较弱，其在C18柱上的保留行为与峰形对封端技术和硅胶纯度敏感，直接影响积分准确性与定量可靠性。

针对上述难点，本实验分别选用迪马科技两款色谱柱进行方法重现：Dikma Protein SEC-400（8.0 mm×300 mm，5 μm）用于纯度分析，主峰理论塔板数约20390；Diamonsil C18(2)（4.6 mm×250 mm，5 μm）用于抑菌剂检查，目标峰形对称，理论塔板数大于15000。结果表明，两款色谱柱均完全满足药典系统适用性要求，为国产色谱柱在该品种质量控制中的应用提供了实验依据。

1 纯度

2 检查：对羟基苯甲酸甲酯